В 2001 году для улучшения качества лабораторной диагностики сифилиса, совершенствования работы и создания единого подхода по ее организации был издан приказ № 87, где приводится новый список рекомендуемых реакций.
В Российской федерации для серо- и ликвородиагностики сифилиса могут быть использованы следующие методы:Если добавить к плазме или сыворотке крови заболевшего сифилисом эмульсии кардиолипинового антигена, то образуется преципитат (комплекс антиген - антитело), он выпадает в виде белых хлопьев. Контролем будут являться заведомо отрицательные и положительные тесты. Эта методика широко используется как скрининговая. Чувствительность метода около 95%. Несмотря на высокую чувствительность метод неспецифичен и в самостоятельном виде не может использоваться как диагностический.
Вперые был применен в 1975 году. Принцип реакции заключается в соединении сифилитического антигена, сорбированного на поверхности твердофазного носителя (лунки полистиролового планшета), с антигеном испытуемой сыворотки крови и выявлении специфического комплекса антиген – антитело с помощью антивидовой иммунной сыворотки, меченной ферментом.
ИФА является хорошим скриниговым тестом. Автоматизированность постановки реакции и учета результатов позволяет одновременно проанализировать большой количество сывороток. ИФА может широко использоваться в процессе динамическогонаблюдения за больным и для оценки результатав лечения. Специфичность – 96-99,9%. Чувствительность 98-100%.
Была предложена в 1965 году.
При соединении эритроцитов, на которые адсобированы антигены бледной трепонемы, с сывороткой крови больного, содержащей специфические антитела, происходит склеивание и выпадение в осадок эритроцитов – гемагглютинация. Применяются микро- и макромодификации РПГА, отличающиеся друг от друга объемными соотношениями испытуемой сыворотки и концентрацией эритроцитов. Существует также методика постановки количественной РПГА.
Реакция оценивается в виде плюсов:
++++ положительная реакция. Эритроциты равномерно устилают поверхность лунки(в виде зонтика)
+++ положительная реакция. Эритроциты устилают поверхность лунки, часть соскальзывает к центру
++слабоположительная реакция. Эритроциты образуют пленку на небольшом участке.
+отрицательна реакция. Эритроциты «пуговкой» лежат на самом дне лунки.
Чувствительность метода составляет 99,4%. Кроме высокой чувствительности, достоинством реакции является простота постановки и низкая стоимость.
Применяется с 1959 года. Метод основан на соединении специфического комплекса антиген-антитело. Который образуется при обработке исследуемой сывороткой антигена, с иммунной сывороткой против глобулинов человека, меченной флюорохромом. РИФ имеет несколько модификаций: РИФ-200, РИФ-абс. с сывороткой крови и капиллярной кровью, РИФ-ц и др.Чувствительность метода РИФ-200 и РИФ-абс. – 99%. В клинической практике РИФ незаменима в диагностике сифилиса на ранних стадиях, особенно в инкубационном периоде и в серонегативном периодах первичного сифилиса. Некоторые модификации, основанные на предварительном выделении с помощью гель-фильтрации из испытуемой сыворотки фракции IgM, позволяют определять антитела уже на 6-9 неделе, данные тесты являются наиболее ранними в диагностике сифилиса.
Методика основана на утрате подвижности живых патогенных бледных трепонем при воздействии на них исследуемой сыворотки больного сифилисом в присутствии комлемента, в то время как при смешивании с сывороткой здоровых лиц подвижность трепонем сохраняется. Феномен утраты подвижности бледными трепонемами у больных сифилисом обусловлен наличием в плазме больных иммобилизирующих противотрепонемных антител. В данной реакции используется взвесь патогенных бледных трепонем, получаемых из семенника кролика на седьмые-девятые сутки после его заражения. Реакция оценивается через 18-20 часов в микроскопе в темном поле. При числе обездвиженных трепонем до 25% реакция считается отрицательной, 25 – 30 – сомнительной. 31-50% слабоположительной, более 50% положительной. В настоящее время РИТ считают арбитром при постановке диагноза.
Одним из потенциалов повышения чувствительности и специфичности серологических диагностических тестов является использование рекомбинантных аналогов иммунодоминантных белков T.pallidum вместо смеси антигенов, полученных с помощью ультразвуковой дезинтеграции культуральных клеток.
РИТ, РИФ, ИФА и РПГА являются высокоспецифичными реакциями на сифилис. Они относятся к диагностическим подтверждающим тестам. При этом в связи с РИТ, РИФ, ИФА и РПГА являются высокочувствительными и простотой постановки и наличием коммерческих тест - систем ИФА и РПГА могут быть и высокоэффективными отборочными тестами.
Ввиду различной чувствительности при разных формах сифилиса, специфичности и сложности постановки каждая из указанных реакций имеет свое предназначение.
Профилактическое обследование населения на сифилис можно проводить с помощью МР, ИФА и РПГА. Все организационные вопросы по применению данных реакций с этой целью решаются органами здравоохранения на местах в зависимости от местных условий и возможностей.
Если получен положительный результат в МР пациент должен быть обследован дерматовенерологом с повторным исследованием плазмы крови в любом диагностическом тесте на сифилис. При обследовании доноров необходимо применять МР или ИФА или РПГА, но обязательно в сочетании с МР. Постановка двух реакций одновременно обусловлена высокой ответственностью данного исследования. МР в количественном варианте с экономической точки зрения необходимо использовать в качестве контроля эффективности лечения, заменив ею количественную постановку РСК с кардиолипиновым антигеном.
Все указанные выше специфические тесты используются для диагностики всех клинических форм сифилиса, в том числе, скрытого, и для точного определения ложноположительных ответов, полученных в МР. При диагностике латентного сифилиса разумно использовать два специфических теста одновременно. Резюмируя все вышесказанное, последовательность обследования пациентов на сифилис представляется нам в таком:
- во время первичного обследования производится постановка скрининговой(отборочной) реакции микропреципитации
- после завершения лечения ставится реакция микропреципитации или ее модификация и по снижению титра антител определяется динамика заболевания и эффективность лечения. Доказательством рациональности проведенной терапии считается снижение титра антител в четыре и более раз в течение одного года;
- после окончания этого срока проводится постановка той же реакции, что применялась при первичном обследовании. Не стоит забывать, что специфические трепонемные тесты могут иногда не негативировать в течение ряда лет, а в отдельных случаях остаются положительными в течение всей жизни.
Здесь вы можете ознакомиться с тематическим планом заседаний нашего СНК на текущий семестр Подробнее>>
Вашему вниманию предложены некоторые сообщения, из числа тех, что были сделаны на наших заседаниях Подробнее>>
Ссылки на ресурсы, ориентированные на тех, кто интересуется дерматовенерологией, вы можете посмотреть здесь>>
Адреса наших клинических баз со схемами проезда, а также контактные телефоны и адреса электронной почты вы найдете здесь>>